Messa a punto e validazione di un metodo HPLC-MS per la determinazione in matrice cheratinica di Etilglucuronide, marker per la diagnosi di abuso alcolico cronico

My thesis work has been carried out at the Department “Funzione di Tossicologia e Alcologia” of the Laboratorio di Sanità Pubblica (LSP) of the ATS of Brescia, which deals with the execution of toxicological analysis with diagnostic purposes in clinical, forensic, and medico-legal fields, in order to diagnose use/abuse, intoxication, drug/alcohol addiction, etc. I took part in the sample preparation, and in the consequent set-up and validation, according to the Guidelines of the Istituto Superiore di Sanità (2013) and ICH Q2 (R1) (1996), of an HPLC-ESI-MS/MS method for the determination of Ethylglucuronide (EtG) in keratin matrix. EtG is a minor metabolite of ethyl alcohol, but it has excellent diagnostic qualities, in terms of specificity and sensitivity, to identify chronic alcohol consumption. The choice of the piliferous matrix has the advantage of an easy sampling and preservation, and of identifying, not only a recent continuous abuse, but also a previous chronic one. The method has proven to be accurate, precise, sensitive, fast and suitable for routine applications, perfectly consistent with the need of the LSP to perform rapid analysis and diagnoses. In addition, short/medium term sample stability studies were conducted at different temperatures with the aim to demonstrate and set correct sample storage procedures.

Il mio lavoro di tesi si è svolto presso il reparto “Funzione di Tossicologia e Alcologia” del Laboratorio di Sanità Pubblica (LSP) dell’ATS di Brescia, che si occupa dell’esecuzione di analisi tossicologiche con finalità diagnostiche in ambito clinico, forense e medico-legale, allo scopo principale di eseguire diagnosi di uso/abuso, intossicazione, tossico/alcol-dipendenza, etc. Ho seguito la preparazione del campione e la conseguente messa a punto e validazione, secondo Linee Guida dell’Istituto Superiore di Sanità (2013) e ICH Q2(R1) (1996), di un metodo HPLC-ESI-MS/MS, per l’analisi di Etilglucuronide (EtG) in matrice cheratinica. L’EtG è un metabolita minore dell’alcol etilico, ma con ottime qualità diagnostiche in termini di specificità e sensibilità, per identificare il consumo cronico di alcol. La scelta della matrice pilifera ha il vantaggio di un prelievo e di una conservazione facili e di individuare, non soltanto un abuso continuo recente, ma anche un abuso cronico pregresso. Il metodo si è dimostrato accurato, preciso, sensibile, veloce e adatto ad applicazioni routinarie, in completa linea con la necessità del LSP di eseguire analisi e diagnosi rapide. Sono stati inoltre condotti studi di stabilità del campione a breve/medio termine a diverse temperature, allo scopo di comprovare e settare corrette procedure di conservazione dei campioni.