This thesis project has focused on the expression of two bivalent scFv antibody fragments (called diabodies) with an agonistic activity against the Met receptor, and the subsequent validation of their biological activity. One of these diabodies (3H3_SH) is the wild type form developed from the sheep immunoglobulin, while the other one (3H3_zb2) is the humanized form of the wild type. The development of diabodies is necessary to obtain the dimerization, thus the activation of Met receptor. Met receptor is a transmembrane tyrosine kinase receptor expressed by epithelial cells and the binding of its ligand, the hepatocyte growth factor/scatter factor (HGF/SF), allows the activation of the receptor. In particular, the binding of HFG/SF causes dimerization and conformational changes of the extra-cellular part of the receptor, which results in the activation of the kinase activity mediated by the intra-cellular kinase domain of MET. This leads to the activation of the biological activity of the receptor which regulates different cellular function include proliferation, cell cycle progression, survival, apoptosis, metabolism and angiogenesis. In this way the Met receptor triggers some fundamental processes such as morphogenesis and tissue regeneration. For this reason, the development of the antibody fragments has an important therapeutic value. Antibodies with agonistic activity against the Met are important in the field of regenerative medicine acting on various tissue such as liver, lungs and kidney. However, also antibodies or antibody fragments with blocking activity are extremely relevant for their anti-tumor potential. The development of the antibody fragments has additional advantages both the diagnostic and therapeutic purposes, in fact due to their small dimensions they are able to better penetrate the tissues.
Questo progetto di tesi si è concentrato sull'espressione di due frammenti di anticorpi bivalenti scFv (chiamati diabodies) con un'attività agonistica contro il recettore Met, e la successiva validazione della loro attività biologica. Uno di questi diabodies (3H3_SH) è la forma wild type sviluppata dall'immunoglobulina di pecora, mentre l'altro (3H3_zb2) è la forma umanizzata del wild type. Lo sviluppo dei diabodies è necessario per ottenere la dimerizzazione, quindi l'attivazione del recettore Met. Met recettore è un recettore tirosin chinasico transmembrana espresso dalle cellule epiteliali e il legame del suo ligando, il fattore di crescita degli epatociti/fattore di dispersione (HGF/SF), consente l'attivazione del recettore. In particolare, il legame di HFG/SF provoca la dimerizzazione e il cambiamento conformazionale della parte extracellulare del recettore, che si traduce nell'attivazione dell'attività chinasica mediata dal dominio chinasico intracellulare di MET. Ciò porta all'attivazione dell'attività biologica del recettore che regola diverse funzioni cellulari quali la proliferazione, la progressione del ciclo cellulare, la sopravvivenza, l'apoptosi, il metabolismo e l'angiogenesi. In questo modo il recettore Met innesca alcuni processi fondamentali come la morfogenesi e la rigenerazione dei tessuti. Per questo motivo lo sviluppo dei frammenti anticorpali ha un importante valore terapeutico. Gli anticorpi con attività agonistica contro il Met sono importanti nel campo della medicina rigenerativa che agiscono su vari tessuti come fegato, polmoni e reni. Tuttavia, anche anticorpi o frammenti di anticorpi con attività bloccante sono estremamente rilevanti per il loro potenziale antitumorale. Lo sviluppo dei frammenti anticorpali presenta ulteriori vantaggi sia ai fini diagnostici che terapeutici, infatti grazie alle loro piccole dimensioni riescono a penetrare meglio nei tessuti.
L'espressione e l'attività biologica di frammenti anticorpali contro il recettore Met
INDINO, ELEONORA
2020/2021
Abstract
This thesis project has focused on the expression of two bivalent scFv antibody fragments (called diabodies) with an agonistic activity against the Met receptor, and the subsequent validation of their biological activity. One of these diabodies (3H3_SH) is the wild type form developed from the sheep immunoglobulin, while the other one (3H3_zb2) is the humanized form of the wild type. The development of diabodies is necessary to obtain the dimerization, thus the activation of Met receptor. Met receptor is a transmembrane tyrosine kinase receptor expressed by epithelial cells and the binding of its ligand, the hepatocyte growth factor/scatter factor (HGF/SF), allows the activation of the receptor. In particular, the binding of HFG/SF causes dimerization and conformational changes of the extra-cellular part of the receptor, which results in the activation of the kinase activity mediated by the intra-cellular kinase domain of MET. This leads to the activation of the biological activity of the receptor which regulates different cellular function include proliferation, cell cycle progression, survival, apoptosis, metabolism and angiogenesis. In this way the Met receptor triggers some fundamental processes such as morphogenesis and tissue regeneration. For this reason, the development of the antibody fragments has an important therapeutic value. Antibodies with agonistic activity against the Met are important in the field of regenerative medicine acting on various tissue such as liver, lungs and kidney. However, also antibodies or antibody fragments with blocking activity are extremely relevant for their anti-tumor potential. The development of the antibody fragments has additional advantages both the diagnostic and therapeutic purposes, in fact due to their small dimensions they are able to better penetrate the tissues.È consentito all'utente scaricare e condividere i documenti disponibili a testo pieno in UNITESI UNIPV nel rispetto della licenza Creative Commons del tipo CC BY NC ND.
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https://hdl.handle.net/20.500.14239/13561