IL PEROSSIDO DI IDROGENO (H2O2) INDUCE INGRESSO DI CA2+ EXTRACELLULARE E APOPTOSI, ATTRAVERSO L’ATTIVAZIONE DI TRPA1, IN COLTURE PRIMARIE DI CELLULE DI CARCINOMA COLORETTALE METASTATICO

Le specie reattive dell'ossigeno (ROS) sono una componente cruciale del microambiente tumorale che potrebbero indurre apoptosi nelle cellule tumorali. La proteina TRPA1 è un canale cationico, non selettivo, polimodale che mostra un'elevata permeabilità al Ca2+ e che può rilevare la presenza di ROS, compreso il perossido di idrogeno (H2O2), in diversi tipi di cancro. Nel presente lavoro di tesi è stata valutata, per la prima volta, l’espressione di TRPA1 e la sua sensibilità allo stress ossidativo in colture primarie di carcinoma colorettale metastatico (mCRC). Per verificare i livelli di espressione della proteina TRPA1, le cellule mCRC sono state stimolate con isotiocianato di allile (AITC), potente agonista selettivo di TRPA1, la cui risposta è stata un robusto ingresso di Ca2+. In accordo con i risultati ottenuti, è stato inoltre dimostrato che l'ingresso di Ca2+ mediato dall’AITC veniva compromesso sia da HC-030031, antagonista selettivo di TRPA1, sia rimuovendo Ca2+ dalla soluzione extracellulare. Allo stesso modo, anche la somministrazione esogena di H2O2 induceva un aumento della concentrazione intracellulare di Ca2+, che risultava maggiore nelle cellule mCRC rispetto alle cellule non neoplastiche; anche in questo caso, per confermare i risultati ottenuti, l’ingresso di Ca2+ mediato dall’H2O2 è stato compromesso sia trattando le cellule con HC-030031 sia rimuovendo Ca2+ dalla soluzione extracellulare. Infine, è stato dimostrato che la stimolazione con AITC e H2O2, riduceva sia i livelli di proliferazione che di vitalità nelle cellule mCRC, grazie all’attivazione del pathway apoptotico Ca2+- dipendente, mediato dalle caspasi 3/7. Questi dati supportano l'idea che l'attivazione di TRPA1, mediata sia dall’AITC che dall’ H2O2, induce apoptosi nelle cellule mCRC e quindi potrebbe rappresentare una strategia terapeutica alternativa per il trattamento di pazienti affetti da mCRC.