Sviluppo di un metodo analitico quantitativo mediante gascromatografia/spettrometria di massa a triplo quadrupolo (GC/MS/MS) per la determinazione di α-fluoro-β-alanina in urina.

A method for the quantitation of α-fluoro-β-alanine (FBAL), the main metabolite 5-fluorouracil (5- FU), is described. Among antineoplastic drugs (ADs), 5-FU is the most commonly applied drug in cancer therapy. The main objective of this study was to develop a reliable method that would be easy to run on a gas chromatographic system coupled with tandem mass spectrometry. AFBA was simultaneously derivatized and extracted with ethyl chloroformate/methanol/pyridine/chloroform. This method was based on the use of a liquid/liquid extraction enabling urinary extracts to be clear of endogenous interferences affecting quantitative results. The assay was developed in human urine with the use of a labeled internal standard (β-alanine-d4) to minimize experimental error. The recovery of FBAL was between 99 and 111%. The lower limit of quantitation (LOQ) was 1.25 ng/mL This assay was successfully applied to determine the levels of this metabolite in a large number of urine samples taken from personnel who were occupationally exposed to ADs.

Nel presente elaborato viene descritto un metodo per la quantificazione dell'α-fluoro-β-alanina (FBAL), il principale metabolita 5-fluorouracile (5-FU). Tra i farmaci antineoplastici (AD), il 5-FU è il farmaco più comunemente utilizzato nella terapia del cancro. L'obiettivo principale di questo studio è lo sviluppo di un metodo analitico affidabile, facile da eseguire su un sistema gascromatografico accoppiato con spettrometria di massa a triplo quadrupolo. AFBA è simultaneamente derivatizzata ed estratta con etilcloroformiato/metanolo/piridina/cloroformio. Questo metodo si basa sull'uso di un'estrazione liquido/liquido che consente agli estratti urinari di essere privi di interferenze endogene in grado di interferire con risultati quantitativi. Il metodo è stato sviluppato in urina umana con l'uso di uno standard interno marcato (β-alanina-d4) per ridurre al minimo l'errore sperimentale. Il recupero di FBAL è compreso tra il 99 e il 111. Il limite di quantificazione (LOQ) è 1,25 ng/mL. Questo test è stato applicato con successo per determinare i livelli di questo metabolita in un gran numero di campioni di urina prelevati da personale professionalmente esposto a AD.