We worked to generate a catalitically dead mutant of the enzyme, introducing point mutations in the nucleotide sequence of the RNase H2A gene. Then, mutated protein was purified affinity chromatography and the its activity was tested. After a double mutant ezyme (RNase H2 D141N D169N) was found to be inactive, we started setting up interaction assays with the MST MicroScale Thermophoresis to study the enzyme Kd (binding affinity) with different substrates.

Generazione e Caratterizzazione Preliminare di Mutanti Cataliticamente Inattivi dell’Enzima RNasi H2 Umano. Abbiamo lavorato per generare un mutante cataliticamente inattivo dell'enzima, introducendo mutazioni puntiformi nella sequenza nucleotidica del gene RNasi H2A. Successivamente la proteina mutata è stata purificata mediante cromatografia di affinità e la sua attività è stata testata. Dopo che un doppio mutante dell'enzima (RNasi H2 D141N D169N) è risultato inattivo, abbiamo iniziato a settare saggi di interazione con la MST MicroScale Thermophoresis per studiare la Kd (affinità di legame) dell'enzima con diversi substrati.

Generation and Preliminary Characterization of Catalytic Dead Mutants of Human RNase H2 Enzyme.

FORMICA, TERESA MARIA
2021/2022

Abstract

We worked to generate a catalitically dead mutant of the enzyme, introducing point mutations in the nucleotide sequence of the RNase H2A gene. Then, mutated protein was purified affinity chromatography and the its activity was tested. After a double mutant ezyme (RNase H2 D141N D169N) was found to be inactive, we started setting up interaction assays with the MST MicroScale Thermophoresis to study the enzyme Kd (binding affinity) with different substrates.
2021
Generation and Preliminary Characterization of Catalytic Dead Mutants of Human RNase H2 Enzyme.
Generazione e Caratterizzazione Preliminare di Mutanti Cataliticamente Inattivi dell’Enzima RNasi H2 Umano. Abbiamo lavorato per generare un mutante cataliticamente inattivo dell'enzima, introducendo mutazioni puntiformi nella sequenza nucleotidica del gene RNasi H2A. Successivamente la proteina mutata è stata purificata mediante cromatografia di affinità e la sua attività è stata testata. Dopo che un doppio mutante dell'enzima (RNasi H2 D141N D169N) è risultato inattivo, abbiamo iniziato a settare saggi di interazione con la MST MicroScale Thermophoresis per studiare la Kd (affinità di legame) dell'enzima con diversi substrati.
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Utilizza questo identificativo per citare o creare un link a questo documento: https://hdl.handle.net/20.500.14239/14636