Selezione e validazione di un metodo ELISA per la ricerca dell'allergene arachide nella produzione del cioccolato.

Il seguente elaborato tratta lo studio effettuato, durante il mio internato presso l’azienda Ferrero, per la selezione e validazione del kit RIDASCREEN® Peanut R6811 della ditta r-Biopharm sulla pasta cacao, attraverso test iniziali per un suo impiego in routine. Tale immunodosaggio enzimatico a sandwich è stato testato per l’analisi quantitativa dell’allergene arachide o di proteine di arachide in cioccolato e prodotti a base di cacao e derivati (materie prime, prodotti semilavorati e prodotti finiti) e in campioni ambientali. L'ELISA a sandwich RIDASCREEN® Peanut (R-Biopharm, codice R6811) utilizza anticorpi monoclonali per rilevare le proteine delle arachidi nella loro forma nativa e lavorata/riscaldata. Per tale kit ELISA, è stato possibile convalidare solo singoli alimenti esemplari di diversi gruppi di prodotti convalidati a causa del gran numero di alimenti. Quando si analizza una matrice, come nel nostro caso, non convalidata, la pasta cacao, è necessario verificare i risultati ottenuti per mezzo di esperimenti di spike. In tal modo possiamo validare il metodo per la matrice di interesse. La ISO 17025, infatti, obbliga qualsiasi laboratorio a validare i metodi non normati, i metodi sviluppati/progettati dal laboratorio, i metodi normati utilizzati al di fuori del proprio campo di applicazione prefissato, come pure estensioni e modifiche di metodi normati per confermare che i metodi siano adatti all'impiego previsto. La validazione deve essere estesa in modo da soddisfare le esigenze di una data applicazione o di un campo di applicazione. Il laboratorio deve registrare i risultati ottenuti, le procedure utilizzate per la validazione, così pure una dichiarazione circa l'idoneità del metodo per l'utilizzo previsto. Prima di tutto devono essere essere definiti: • i criteri di accettabilità della validazione (es. compatibilità dei risultati ottenuti con quelli riportati nel certificato di un materiale di riferimento, o con i criteri di accettabilità dell’organizzatore di un circuito interlaboratorio, o con i risultati di un metodo di riferimento). •I parametri del metodo da determinare, e su quanti livelli.