Analisi di proteine amiloidi mediante spettrometria di massa

Amyloidosis diseases are caused by the misfolding of putative proteins and their subsequent accumulation in the extracellular space to give insoluble and toxic amyloid deposits. This condition leads to tissue damage and organ dysfunction. Currently, over 30 proteins can form amyloid deposits in vivo in humans. Since the clinical management is dependent on the type of protein deposited, it is essential to use analytical techniques which allow unequivocal protein identification. Mass spectrometry-based proteomics has been shown to be a powerful tool for successful amyloid protein identification, and this approach is currently used within a small number of centres throughout the world. The technique is compound class independent and offers the added ability to identify variant and modified proteins with high sensitivity and specificity. The work reported here was focused on two main areas of interest in the amyloidosis field: to improve and validate the proteomics protocol and to undertake structural analyses of serum amyloid P component (SAP), an integral component of all amyloid deposits.

Le amiloidosi sono costituiscono un vasto gruppo di disordini causati dalla deposizione extracellulare di aggregati proteici insolubili, chiamati amiloidi, che derivano dall’anomalo avvolgimento di diverse proteine-precursori con una conformazione a beta-foglietto. Attualmente, sono state identificate più di 30 proteine in grado di formare depositi amiloidi in vivo nell’uomo. Dal momento che la terapia dipende dal tipo di proteina depositata, è necessario ricorrere a tecniche analitiche in grado di fornire un’univoca identificazione delle proteine presenti nel campione. La proteomica basata sull’uso della spettrometria di massa si è rivelata un potente strumento per una efficace identificazione delle proteine amiloidi e tale approccio è attualmente usato in un numero limitato di centri in tutto il mondo. La tecnica offre la preziosa abilità di identificare varianti e proteine modificate con elevata sensibilità e specificità. Il presente lavoro è incentrato su due principali aree di interesse nel campo dell’amiloidosi: il miglioramento e la validazione del protocollo usato in proteomica e l’analisi strutturale della Serum Amyloid P component (SAP), presente in tutti i tipi di depositi amiloidi.