Sviluppo e validazione FDA di un metodo analitico mediante UHPLC-MS/MS per la quantificazione di Everolimus formulato in nanoparticelle di H-Ferritina.

Questo lavoro di tesi descrive lo sviluppo e la validazione FDA di un metodo analitico, mediante UHPLC-MS/MS, per la quantificazione di Everolimus (Eve) caricato in nanoparticelle di H-ferritina. Eve è un immunosoppressore che viene anche utilizzato come chemioterapico antiblastico nellambito della terapia del carcinoma mammario post-menopausa, in quanto i nuovi trial clinici indicano linsorgenza di casi di resistenza alla chemioterapia tradizionale. Una soluzione a tale problema proviene dalla medicina moderna che studia nuove formulazioni dei farmaci in grado di veicolare, in modo più selettivo, i principi attivi già in uso. A tale proposito, sono state utilizzate nanoparticelle di H-ferritina, una proteina umana che è dotata di una capacità intrinseca di arrivare al bersaglio. Gli obiettivi del presente studio sono: i) la determinazione di concentrazioni di Eve allinterno di cages di H-ferritina, ii) il rilascio di Eve da HEve a livello sub-cellulare, ovvero nel compartimento citoplasmatico, iii) la quantificazione di Eve a bassi livelli di concentrazione avendo a disposizione piccoli volumi di matrice. In letteratura sono state pubblicate e descritte un numero elevato di metodologie per la determinazione di questo farmaco in sangue intero nellambito del monitoraggio terapeutico (TDM) poiché Eve ha una farmacocinetica complessa dovuta allo stretto indice terapeutico che caratterizza il farmaco. Tutti i metodi riportati in letteratura evidenziano che leffetto matrice gioca un ruolo importante e purtroppo negativo per la determinazione di questa molecola in campioni biologici. Per questo motivo, la parte sperimentale di questo lavoro di tesi è stata particolarmente complessa. E stato ottimizzato lutilizzo di standard interni marcati, tecniche adeguate di estrazione e di precipitazione proteica. Il metodo analitico ha dimostrato di rispettare i requisiti di accuratezza e precisione richiesti da FDA e dai laboratori analitici, quali parametri necessari per valutare non sola la presenza di Eve allinterno della cellula ma anche lefficacia del farmaco.