Caratterizzazione molecolare e definizione del grado di delezione del gene 22q11.2 mediante qPCR in pazienti pediatrici sottoposti ad intervento di cardiochirurgia.

DiGeorge Syndrome (22q11.2DS) is characterized by the presence of genomic alterations, deletion of the 22q11.2 region. The 22q11.2 deletion is associated with a wide variety of phenotypes: typical facial finding such as short palpebral fissures, a bulbouse nasal tip, small ears; cardiac anomalies: mostly Tetralogy of Fallot, conotruncal defect, interrupted aortic arch; thymus abnormalities; hypoparathyroidism; hypocalcaemia; neuropsychological manifestation. Diagnosis is clinical and confirmed by genetic study. Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) is the gold standard method used to detect 22q11.2 DS. The purposes of this study were: 1) standardization of the quantitative Real Time PCR to detect 22q11.2 microdeletion in pediatric patients undergo heart surgery; 2) Comparison the qPCR method respect to FISH techniques to demonstrate the advantages a disadvantages in terms of time test and costs. The analysis was performed from DNA samples of 21 pediatric patients attending at Unità di Cardiologia Cardiochirurgia Pediatrica - IRCCS Policlinico San Donato. We found that only one patient was positive for DiGeorge Syndrome, with a common 3Mb deletion. In conclusion, our results suggest that the qPCR technique appears to be a very rapid and reliable molecular test, able to detect the common and atypical deletions.

La Sindrome di DiGeorge (22q11.2DS), è caratterizzata e determinata dalla presenza d alterazoni genomiche, soprattutto microdelezioni a livello della regione q11.2 del cromosoma 22. La diagnosi di Sindrome di DiGeorge è clinica e si basa sulla presenza dei segni fenotipici evocativi: facies tipica (dismorfie facciali) come rime palpebrali strette, naso prominente con punta arrotondata, attaccatura delle orecchie bassa; anomalie cardiache come la più frequente Tetralogia di Fallot, difetti conotroncali, interruzione dell'arco aortico; aplasia del timo; ipoparatiroidismo; ipocalcemia; manifestazioni neuropsicologiche. Il sospetto clinico viene confermato attraverso l'indagine genetica. La tecnica di Ibridazione In Situ Fluorescente (FISH) è la metodica di riferimento per identificare la 22q11.2DS. Gli obbiettivi di questo lavoro sono stati: 1) la standardizzazione della Real Time quantitativa per la ricerca della microdelezione nella regione 22q11.2 in pazienti pediatrici sottoposti a intervento di cardiochirurgia; 2) Sperimentare i vantaggi e svantaggi della metodica qPCR in termini di costo e tempistica verso la tecnica FISH. L'analisi è stata condotta partendo da campioni di DNA di 21 pazienti pediatrici afferenti presso l'Unità di Cardiologia e Cardiochirurgia Pediatrica - IRCCS Policlinico San Donato. Di questi 21 solo uno è risultato positivo alla 22q11.2DS e il grado di delezione è risultato essere di 3Mb. Dal presente lavoro si può concludere che la tecnica qPCR presenta dei vantaggi tra i quali il tempo in cui si ottengono i risultati, i costi, la standardizzazione e l'accessibilità della tecnica. Attraverso la qPCR inoltre possono essere rilevate sia le delezioni classiche sia le delezoni atipiche.