Analisi della relazione tra sistema vascolare linfatico, infiammazione e autoimmunità nella sinovite reumatoide.

Rheumatoid Arthritis (AR) is a chronic immune-mediated disease whose target tissue is represented by the synovial membrane of the arthrodial joints. The synovial membrane in progress of AR meets many modifications including proliferation of resident cells and infiltration by circulating immune cells. Chronic synovitis that is established is responsible for clinical manifestations of illness, including joint swelling and development of irreversible osteo-cartilage damage. Mechanisms responsible for the chronicization of synovial flogosis in AR are only partially known. They consist of an increased inflow of cells through neoformed blood vessels, reduced apoptosis, and increased local retention by means of chemo-attracting factors. Immune cells infiltrating the rheumatoid synovial membrane can locally be organized in structures that show morphological and functional analogies with the secondary lymphoid organ, a phenomenon known as ectopic lymphoma. It contributes to pathological mechanisms of the disease by producing autoantibodies and other damage mediators. Lymphatic vascular network is responsible for the drainage of fluids, macromolecules and cells from peripheral tissues to drainage lymph nodes. Inflammatory stimuli can lead to compensatory amplification of the lymphatic network through lymphangioneogenic phenomena; This is functional for the resolution of inflammation. The presence and role of lymph vessels in the synovial membrane in progress of AR has never been documented nor investigated. In this thesis, we have systematically analyzed the lymphatic vascular network through the use of specific markers in a wide range of synovial membranes taken from AR patients. Lymph vessels were quantified and related to histopathological, molecular and clinical characteristics of inflammation and immunological activation. In particular, for this latter aspect, the relationship between lymph vessels, autologous serological profile and serum levels of activity markers from the germinal center was analyzed in detail. The results show that lymphoangiogenase is a phenomenon associated with inflammation, as evidenced by the relationship with the marcophage infiltrate and pro-inflammatory cytokine expression levels. Although necessary, inflammation does not appear sufficient, as most synovial tissues are lacking in a drainage lymphatic network. Although no specific relationship with systemic immunological markers has been found, lymphangioneogenesis, where present, has appeared mutually exclusive to lymphoenogenesis phenomena. Vascular lymphatic dendritic areas never showed, in fact, Lymphocytic B aggregates and germinative centers, which developed instead in lymphatic tissue-free tissue areas. Overall, the results of this work indicate that lymph drainage deficiency can contribute to the persistence of the synovial inflammatory infiltrate in the AR and its local organization in similar lymphoid structures.

L’artrite reumatoide (AR) è una malattia cronica immuno-mediata il cui tessuto bersaglio è rappresentato dalla membrana sinoviale delle articolazioni diartrodiali. La membrana sinoviale in corso di AR va incontro a numerose modificazioni che includono la proliferazione delle cellule residenti e l’infiltrazione da parte di cellule immuni circolanti. La sinovite cronica che si instaura è responsabile delle manifestazioni cliniche di malattia, incluse la tumefazione articolare e lo sviluppo di danno osteo-cartilagineo irreversibile. I meccanismi responsabili della cronicizzazione della flogosi sinoviale in corso di AR sono solo parzialmente conosciuti. Essi consistono in un aumentato afflusso di cellule attraverso vasi sanguigni neoformati, una ridotta apoptosi e una incrementata ritenzione locale ad opera di fattori chemoattrattanti. Le cellule immuni infiltranti la membrana sinoviale reumatoide possono organizzarsi localmente in strutture che mostrano analogie morfologiche e funzionali con l’organo linfoide secondario, fenomeno noto come linfoneogenesi ectopica. Essa contribuisce ai meccanismi patologici di malattia attraverso la produzione di autoanticorpi e altri mediatori di danno. La rete vascolare linfatica è responsabile del drenaggio di fluidi, macromolecole e cellule dai tessuti periferici ai linfonodi drenanti. Gli stimoli infiammatori possono condurre ad amplificazione compensatoria della rete linfatica attraverso fenomeni di linfangioneogenesi; questa è funzionale alla risoluzione dell’infiammazione. La presenza e il ruolo dei vasi linfatici nella membrana sinoviale in corso di AR non è però mai stata documentata né indagata. In questa Tesi di Laurea Sperimentale, abbiamo analizzato in maniera sistematica, attraverso l’uso di marcatori specifici, la rete vascolare linfatica in un’ampia casistica di membrane sinoviali prelevate da pazienti con AR. I vasi linfatici sono stati quantificati e messi in relazione con caratteristiche istopatologiche, molecolari e cliniche di infiammazione e di attivazione immunologica. In particolare, per quest’ultimo aspetto, è stata analizzata nel dettaglio la relazione tra vasi linfatici, profilo autoanticorpale sierologico e livelli sierici di marcatori di attività da centro germinativo. I risultati dimostrano che la linfoangioneogenesi è un fenomeno associato all’infiammazione, come evidenziato dalla relazione con l’infiltrato di marcrofagi e con i livelli di espressione di citochine pro-infiammatorie. Pur essendo necessaria, l’infiammazione non appare però sufficiente, visto che la maggior parte dei tessuti sinoviali sono risultati sprovvisti di una rete linfatica drenante. Nonostante non siano state riscontrate relazioni specifiche con i marcatori immunologici sistemici, la linfangioneogenesi, laddove presente, è apparsa mutualmente esclusiva rispetto ai fenomeni di linfoneogenesi. Le aree ad alta densità vascolare linfatica non mostravano mai, infatti, aggregati B linfocitari e centri germinativi, che si sviluppavano invece in zone di tessuto prive di vasi linfatici. Complessivamente, i risultati di questo lavoro indicano che il deficit di drenaggio linfatico può contribuire alla persistenza dell’infiltrato infiammatorio sinoviale nell’AR e alla sua organizzazione locale in strutture simil-linfoidi.