K1M4 e K1K1: comprendere il ruolo dell'eparina nell'interazione tra HGF/SF e MET

Hepatocyte growth factor/scatter factor (HGF/SF) and its receptor MET play essential roles in the development of organs such as placenta and liver and in the migration of myogenic precursor cells. Its splicing variant, N-terminal domain-kringle 1 (NK1), was demonstrated to behave in vivo as a MET receptor agonist, being fully active only in cells that display heparan sulfate on their surface or in the presence of soluble heparin, differently from HGF/SF itself. A newly developed recombinant receptor agonist, K1K1, a fusion of two receptor binding domains, was unexpectedly discovered to be dependent for its biological activity on the presence of secondary heparin binding site located in the kringle domain. In this thesis, we generated and expressed K1M4, a K1K1 variant bearing one heparin-binding mutant kringle domain, and compared its biological activity and heparin binding ability. K1M4 showed a reduced ability in activating MET receptor and a decreased affinity for heparin binding, suggesting that heparin may have play a role in the interaction of K1K1 with MET receptor.

Il fattore di crescita degli epatociti HGF/SF ed il suo recettore MET giocano un ruolo fondamentale nello sviluppo di organi quali la placenta ed il fegato e nella migrazione delle cellule precursori miogeniche. E' stato dimostrato che la sua variante di splicing NK1, associazione del dominio N-terminale di HGF/SF assieme al dominio kringle 1, si comporti in vivo come un agonista di MET, essendo totalmente attivo solamente nelle cellule che presentano sulla propria superficie molecole di eparan solfato, oppure in presenza di eparina solubile, differentemente da HGF/SF stesso. E' stato scoperto in maniera inaspettata che l'attività biologica di K1K1, nuovo agonista ricombinante di MET sviluppato da poco, nato dalla fusione di due domini interagenti con questo recettore, risulti essere dipendente dalla presenza di un sito di legame per l'eparina secondario localizzato nel dominio kringle. In questa tesi, abbiamo generato ed espresso K1M4, una variante di K1K1 avente un dominio kringle mutato per il legame con l'eparina, e comparato la sua attività biologica e la capacità di legarsi all'eparina. K1M4 ha mostrato una ridotta abilità nell'attivare MET stesso ed un'affinità di legame per l'eparina diminuita, suggerendo che questa possa avere un ruolo nell'interazione tra K1K1 con il recettore MET.