Sviluppo di un metodo HPLC-UV per l’identificazione e la separazione della vitamina D3 dal suo isomero trans e dalla previtamina

Il presente lavoro descrive lo sviluppo di un metodo HPLC-UV, alternativo al metodo riportato in Farmacopea, per l’identificazione e la separazione della vitamina D3 dal suo isomero 5,6-trans-vitamina D3 (isomero geometrico) e dalla previtamina D3 (isomero di posizione) generati mediante fotodegradazione e degradazione termica della vitamina D3. I metodi sviluppati sono stati valutati nella capacità di separazione degli isomeri della vitamina D3 utilizzando standard commerciali di vitamina D3 e 5,6-trans-vitamina D3; la previtamina D3 è stata invece generata dalla vitamina D3 standard sottoposta al trattamento suggerito dalla Farmacopea statunitense (USP). A questo scopo, sono state prese in considerazione due colonne: una Gemini C18 e una Hypercarb. Le analisi RP-HPLC-UV con colonna Gemini C18 e fase mobile acetonitrile/etanolo (94:6 v/v) hanno permesso una parziale separazione tra la vitamina D3 e il suo isomero 5,6-trans-vitamina D3, ma non hanno consentito di ottenere analisi riproducibili in termini di tempi di ritenzione e aree, evidenziando problemi di contropressioni che non risultano stabili. Le analisi con PGC-HPLC-UV con colonna Hypecarb e fase mobile acetonitrile/isopropanolo/tetraidrofurano (23.5:23.5:53 v/v) hanno permesso di separare gli isomeri della vitamina D3 che non erano stati ben risolti sulla colonna Gemini C18. Il metodo PGC-HPLC-UV ha tutti i presupposti per essere testato e validato secondo le linee guida ICH per i test di stabilità e per l’identificazione e la quantificazione dell’impurezza trans e della previtamina D3 presenti nei prodotti farmaceutici o negli integratori alimentari. Quindi, potrebbe essere un metodo appropriato per le analisi di routine di vari prodotti farmaceutici a base di vitamina D3.