Toxoplasma gondii is a parasitic protease responsible for Toxoplasmosis in humans. The severity of clinical manifestations is often related to the different parasite genotype. In fact, there are 3 clonal lines of T.gondii and different recombinant strains with variable global distribution. In Italy, to date, studies have never been carried out to define the circulating strains and their correlation with the various pathologies. The aim of the study was to develop an enzyme immunoassay ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), able to detect in human serum antibodies directed against amino acid sequences of antigens that characterize the 3 main genotypes (I-II-III). This test is able to discriminate between the type II strain (frequent in Italy) and the other strains (I-III and atypical) and therefore could be used for an epidemiological investigation and to correlate the different strains to different pathologies (lymphadenitis , congenital infections, chorioretinitis) or to different ethnic groups. In the Parasitology laboratory of SC of Microbiology and Virology of the IRCCS Policlinico San Matteo di Pavia Foundation, 56 patient sera were selected, of which 32 positive and 24 negative (control) previously tested with VIDAS IgG II test (Biomerieux - Mercy l'Etoile - France) Liaison CLIA IgG, CLIA IgM. The 32 positive samples were divided into 3 groups according to the IgG titre: group 1, 7 samples with IgG titers higher than 3000 IU; group 2, 13 samples with IgG titers between 1000 and 3000 IU; group 3, 12 samples with IgG titers lower than 1000 IU. For the ELISA test and the choice of the peptides used, the protocol developed by Kong J.T. et al 2003. All 24 control samples were negative, while positive samples, 7/7 of group 1 were positive: 6 for serotype II and 1 for serotype I / III; 4/13 of group 2 were positive, all of serotype II; 12/12 of group 3 were negative. Although the test requires high concentrations of specific antibodies and therefore has a low sensitivity, it has shown a good discriminating capacity of type II strains from those of type I-III. Further studies and analyzes will be carried out to improve the test performance by expanding the sera panel, including those of immigrant patients.
Toxoplasma gondii è un protista parassitario responsabile della Toxoplasmosi nell’uomo. La gravità delle manifestazioni cliniche risulta spesso correlata al diverso genotipo del parassita. Esistono infatti 3 linee clonali di T.gondii e diversi ceppi ricombinanti con distribuzione mondiale variabile. In Italia, ad oggi, non sono mai stati effettuati studi finalizzati a definire i ceppi circolanti e la loro correlazione con le diverse patologie. Lo scopo dello studio è stato quello di sviluppare un saggio immunoenzimatico ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), in grado di rilevare nel siero umano anticorpi diretti contro sequenze amminoacidiche di antigeni che caratterizzano i 3 genotipi principali (I-II-III). Questo test è in grado di discriminare tra il ceppo di tipo II (frequente in Italia) e gli altri ceppi (I–III ed atipici) e quindi potrebbe essere utilizzato per un’indagine epidemiologica e per correlare i diversi ceppi alle diverse patologie (linfoadeniti, infezioni congenite, corioretiniti) o alle diverse etnie. Presso il laboratorio di Parassitologia della SC di Microbiologia e Virologia della Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo di Pavia sono stati selezionati 56 sieri di pazienti di cui 32 positivi e 24 negativi (controllo) precedentemente testati con test VIDAS IgG II(Biomerieux - Mercy l’Etoile – France) Liaison CLIA IgG, CLIA IgM. I 32 campioni positivi sono stati suddivisi in 3 gruppi a seconda del titolo di IgG: gruppo 1, 7 campioni con titoli IgG maggiori di 3000 UI; gruppo 2, 13 campioni con titoli IgG compresi tra 1000 e 3000 UI; gruppo 3, 12 campioni con titoli IgG minori di 1000 UI. Per l’esecuzione del test ELISA e la scelta dei peptidi impiegati è stato seguito il protocollo messo a punto da Kong J.T. et al 2003. Tutti i 24 campioni controllo sono risultati negativi mentre dei campioni positivi, 7/7 del gruppo 1 sono risultati positivi: 6 per sierotipo II e 1 per sierotipo I/III; 4/13 del gruppo 2 sono risultati positivi, tutti del sierotipo II; 12/12 del gruppo 3 sono risultati negativi. Sebbene il test richieda alte concentrazioni di anticorpi specifici ed abbia quindi una scarsa sensibilità, ha dimostrato una buona capacità discriminante dei ceppi di tipo II da quelli di tipo I-III. Ulteriori studi ed analisi verranno effettuate per migliorare le performance del test ampliando il pannello di sieri, includendo anche quelli di pazienti immigrati.
Test ELISA per la sierotipizzazione di Toxoplasma gondii: messa a punto e prime valutazioni
BANI, ENRICO
2017/2018
Abstract
Toxoplasma gondii is a parasitic protease responsible for Toxoplasmosis in humans. The severity of clinical manifestations is often related to the different parasite genotype. In fact, there are 3 clonal lines of T.gondii and different recombinant strains with variable global distribution. In Italy, to date, studies have never been carried out to define the circulating strains and their correlation with the various pathologies. The aim of the study was to develop an enzyme immunoassay ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), able to detect in human serum antibodies directed against amino acid sequences of antigens that characterize the 3 main genotypes (I-II-III). This test is able to discriminate between the type II strain (frequent in Italy) and the other strains (I-III and atypical) and therefore could be used for an epidemiological investigation and to correlate the different strains to different pathologies (lymphadenitis , congenital infections, chorioretinitis) or to different ethnic groups. In the Parasitology laboratory of SC of Microbiology and Virology of the IRCCS Policlinico San Matteo di Pavia Foundation, 56 patient sera were selected, of which 32 positive and 24 negative (control) previously tested with VIDAS IgG II test (Biomerieux - Mercy l'Etoile - France) Liaison CLIA IgG, CLIA IgM. The 32 positive samples were divided into 3 groups according to the IgG titre: group 1, 7 samples with IgG titers higher than 3000 IU; group 2, 13 samples with IgG titers between 1000 and 3000 IU; group 3, 12 samples with IgG titers lower than 1000 IU. For the ELISA test and the choice of the peptides used, the protocol developed by Kong J.T. et al 2003. All 24 control samples were negative, while positive samples, 7/7 of group 1 were positive: 6 for serotype II and 1 for serotype I / III; 4/13 of group 2 were positive, all of serotype II; 12/12 of group 3 were negative. Although the test requires high concentrations of specific antibodies and therefore has a low sensitivity, it has shown a good discriminating capacity of type II strains from those of type I-III. Further studies and analyzes will be carried out to improve the test performance by expanding the sera panel, including those of immigrant patients.È consentito all'utente scaricare e condividere i documenti disponibili a testo pieno in UNITESI UNIPV nel rispetto della licenza Creative Commons del tipo CC BY NC ND.
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https://hdl.handle.net/20.500.14239/24760