Valutazione dei gruppi allelici predisponenti alla malattia celiaca, in una coorte di pazienti del ponente ligure.

Coeliac disease is a chronic enteropathy mediated by the immune system, caused by the ingestion of gluten. This patology occurs in about 1% of the population wordlwise and sereval study have shown an increase in the prevalence of celiac disease. It's a multifactorial disease because there are both genetic and envinroment factors. The genetics influence is given mostly by the human leukocite antigens HLA DQ2 and DQ8. Indeed, in 90% of affected patients, the present haplotype is DR * 0301-DQA1 * 0501-DQB1 * 0201, which respectively encode for the alpha and beta chain of the class II HLA DQ2 molecule, which is involved in the mechanism of celiac disease pathogenesis. This disease can cause a wide variety of intestinal and extraintestinal symptoms. Infact there are different forms: typical, atypical, silent and latent. For this reason, it is not always easy to diagnose. However, in general, the measurement of tissutal Transglutaminase Antibodies (IgA-tTG) is performed, followed by duodenal biopsy to test for any damage to intestinal tissue and the presence of intraepithelial lymphocytes, crypt hyperplasia or atrophy of intestinal villi. Patients with high clinical suspect of celiac disease, unresolved by screening tests, those with discordant serological tests, those with discontinuous serological test with histologic exam, and relatives first degree are subjected to genetic test for determination of HLA DQ2 and / or DQ8. The genetic test for the determination of the haplotypes is based on the principle of reverse strand hybridization, according to which specific oligonucleotide probes immobilized on nitrocellulose strips hybridize with amplified biotinylates. The perfect complementarity between amplified and probe generates a specific signal following colorimetric detection. The analysis includes three successive phases: the DNA synthesis of whole blood DNA, the simultaneous amplification of target DNA regions by biotinylated primers and hybridization between biotinylated amplified strips with allele-specific oligonucleotide probes. Biotinylated hybrids are subsequently revealed by exploiting the biotin-streptavidin-bond conjugated with alkaline phosphatase and an appropriate substrate. Over the period 2012-2017 1053 patients arrived to SSD Molecolar Biology of the Hospital Santa Corona in Pietra Ligure (Savona). The patients underwent the genetic test have shown a predisposition to celiac disease in 49,48% of cases. The positive results are compared with the analyse of uncertain cases, namely subjects with aplotype DR5 DQ7 or association DR5 DQ7 DR4 DQ8 and with the analyse of negative cases. An interesting result is the study of the association of allleles. In patients seected by the clinic and confermated by hystologic exam over 7,94% of DR3 DQ2 DR4 DQ8, we have found 37,57% of DR5 DQ7 DR3 DQ2, 26,98% of DR5 DQ7 DR7 DQ2, 16,93% of DR7 DQ2 DR3 DQ2, 7,94% of DR4 DQ8 DR7 DQ2 and 2,64% of DR5 DQ7 DQ2. The results of our study show that of 521 patients with positive results 144 have aplotype DR3 DQ2 (27,64%), 117 aplotype DR7 DQ2 (22,46%), 71 aplotype DR4 DQ8 (13,63%). In particular, in the west of Liguria it is observed often the association DR5 DQ7 DR3 DQ2, that starts to be considered important both in diagnosis and in prevention of high risk group.

La celiachia è un'enteropatia cronica che coinvolge il sistema immunitario, causata dall'ingestione del glutine. Approssimativamente l'1% della popolazione è affetta da questa patologia e diversi studi hanno dimostrato un aumento dell'incidenza della patologia negli ultimi cinquant'anni. È una malattia multifattoriale poiché vanno ad interagire insieme fattori genetici e fattori ambientali, tra cui l'alimentazione o eventuali infezioni gastrointestinali. L'influenza genetica è data soprattutto dal sistema di istocompatibilità HLA di classe II DQ2 e/o DQ8. Infatti nel 90% dei pazienti affetti l'aplotipo presente è DR*0301-DQA1*0501-DQB1*0201 che codificano rispettivamente per la catena alfa e beta della molecola di classe II HLA DQ2, la quale è coinvolta nel meccanismo di patogenesi della celiachia. Questa malattia può determinare un'ampia varietà di sintomi, sia intestinali che extraintestinali. Infatti esistono diverse forme: tipica, atipica, silente e latente. Per questo motivo non sempre è di facile diagnosi. Comunque, in generale, viene effettuata la misura degli anticorpi anti transglutaminasi tissutali (IgA-tTG), seguita dalla biopsia duodenale per verificare la presenza di eventuali danni al tessuto dell'intestino e la presenza di linfociti intraepiteliali, l'iperplasia delle cripte o l'atrofia dei villi. I pazienti con elevato sospetto clinico di celiachia, non risolto con test di screening, quelli con test sierologici discordanti tra loro, quelli con test sierologico discordante con l'esame istologivo e i soggetti con famiiarità di I grado vengono sottoposti al test genetico per la determinazione di HLA DQ2 e/o DQ8. Il test genetico per la determinazione degli aplotipi si basa sul principio dell'ibridazione inversa su striscia, in base al quale sonde oligonucleotidiche specifiche immobilizzate su strisce di nitrocellulosa ibridano con amplificati biotinilati. La perfetta complementarietà tra amplificati e sonda genera un segnale specifico in seguito alla rilevazione colorimetrica. L'analisi comprende tre fasi successive: l'isolamento del DNA da sangue intero , l'amplificazione simultanea delle regioni target di DNA mediante primers biotinilati e l'ibridazione su striscia degli amplificati biotinilati con sonde oligonucleotidiche allele-specifiche. Gli ibridi biotinilati sono successivamente rivelati sfruttando il legame biotina-streptavidina coniugata con fosfatasi alcalina ed un appropriato substrato. Nel periodo 2012-2017 sono afferiti alla SSD Biologia Molecolare dell'Ospedale Santa Corona di Pietra Ligure (Savona) 1053 pazienti provenienti dal Ponente Ligure.. I pazienti sottoposti al test hanno dimostrato una predisposizione alla malattia celiachia nel 49,48% dei casi. Le positività sono state confrontate con l'analisi dei casi dubbi, ovvero dei soggetti aventi unicamente aplotipo DR5-DQ7 oppure l'associazione DR5-DQ7 DR4 DQ8 e anche con l'analisi dei casi negativi. Un interessante risutato emerge dallo studio delle associazioni dei gruppi allelici riscontrati. Nei pazienti selezionati dalla clinica e confermati dal dato istologici oltre al 7,94% di DR3 DQ2 DR4 DQ8, considerato convenzionalmente l'unico risultato genetico diagnostico, abbiamo riscontrato il 37,57% di DR5 DQ7 DR3 DQ2, il 26,98% di DR5 DQ7 DR7 DQ2, il 16,93% di DR7 DQ2 DR3 DQ2, il 7,94% di DR4 DQ8 DR7 DQ2 e il 2,64% di DR5 DQ7 DQ2. I risultati del nostro studio dimostrano che su 521 pazienti (49,48%), con precedente selezione clinico-anamnestica, si è rilevata la presenza di 144 pazienti con aplotipo DR3 DQ2 (27,64%), 117 pazienti con aplotipo DR7 DQ2 (22,46%), 71 pazienti con aplotipo DR4 DQ8 (13,63%). In particolare, nel ponente ligure si osserva frequentemente l'associazione DR5 DQ7 DR3 DQ2, che inizia ad essere considerata importante sia nella diagnosi sia nella prevenzione di gruppi a rischio.