Convalida di un disinfettante da utilizzare in una clean room

The work described in this thesis was carried out at the laboratory of the Doppel Farmaceutici company in Rozzano (Milan) and aimed to validate a quaternary ammonium-based disinfectant on two surfaces (PVC and steel), which constitute the company's equipment and flooring. Disinfectants are chemical compounds used to eliminate or reduce the number of microorganisms from surfaces, objects and environments. Validating a disinfectant means evaluating the disinfection process, i.e. the disinfectant's ability to remove or inactivate the microorganisms actually present during daily use. The selection of the disinfectant depends on the type of surface to be treated, the level of disinfection required and the environment of use. The disinfectant under study acts by denaturing proteins and interfering with the metabolism of microorganisms, increasing cell permeability, and showing biocidal activity against bacteria and fungi. Although disinfectants are mainly used in the medical and surgical fields, they are also used in pharmaceutical production and other industrial contexts. The work involved a series of tests to determine the efficacy of the disinfectant on PVC and steel. In preparation for the tests, an analysis of the microbial map of the injectable department was carried out to select the most representative microbial strains. Subsequently, known-titer suspensions of these microorganisms were prepared and used for efficacy tests. Three main tests were conducted: 1. Technical recovery verification: this test verified that the strain deposited on the surfaces was correctly recovered by swabbing or strip immersion techniques, with a minimum recovery of 70%. The test was passed with a recovery greater than or equal to 70% on both surfaces analyzed. 2. Method verification: the reliability of the analysis method was tested, ensuring that the culture media used were suitable for allowing the growth of the microorganisms that survived the disinfectant treatment. The strains showed a recovery rate greater than 70%, confirming the reliability of the method. 3. Verification of the efficacy of the disinfectant: the disinfectant was applied to the surfaces treated with the microbial strains, at different contact times (5, 10 and 15 minutes). The reduction in the number of microorganisms had to be at least 4 logs (3 logs for spores). The most significant results were obtained with contact times of 10 and 15 minutes, with a reduction greater than 4 logs for bacteria and 3 logs for spores, on both surfaces. The results reported in these theses show that the disinfectant is effective in significantly reducing the microbial load on the treated surfaces, including spore-forming microorganisms. The data are in line with the European regulations on biocides and the FDA guidelines, confirming that the disinfectant is suitable for use in company conditions. In the future, it will be used in accordance with the provided indications, ensuring a safe environment for pharmaceutical production.

Il lavoro descritto in questa tesi è stato svolto presso il laboratorio dell'azienda Doppel Farmaceutici di Rozzano (Milano) e ha avuto come obiettivo la convalida di un disinfettante a base di ammonio quaternario su due superfici (PVC e acciaio), che costituiscono le attrezzature e le pavimentazioni aziendali. I disinfettanti sono composti chimici utilizzati per eliminare o ridurre il numero di microrganismi da superfici, oggetti e ambienti. Convalidare un disinfettante significa valutare il processo di disinfezione, ossia la capacità del disinfettante di rimuovere o inattivare i microrganismi realmente presenti durante l'uso quotidiano. La selezione del disinfettante dipende dal tipo di superficie da trattare, dal livello di disinfezione richiesto e dall'ambiente di utilizzo. Il disinfettante oggetto dello studio agisce denaturando le proteine e interferendo con il metabolismo dei microrganismi, aumentando la permeabilità cellulare, e mostrando attività biocida contro batteri e funghi. Sebbene i disinfettanti siano impiegati principalmente in ambito medico e chirurgico, sono anche usati nella produzione farmaceutica e in altri contesti industriali. Il lavoro ha previsto una serie di test per determinare l'efficacia del disinfettante su PVC e acciaio. In preparazione ai test, è stata effettuata un'analisi della mappa microbica del reparto iniettabili, per selezionare i ceppi microbici più rappresentativi. Successivamente, sono state preparate sospensioni a titolo noto di questi microrganismi, utilizzate per le prove di efficacia. Sono stati condotti tre principali test: 1. Verifica tecnica di recovery: questo test ha verificato che il ceppo deposto sulle superfici fosse recuperato correttamente tramite tecniche di swabbing o immersione delle strip, con un recupero minimo del 70%. Il test è stato superato con un recupero superiore o uguale al 70% su entrambe le superfici analizzate. 2. Verifica del metodo: si è testata l'affidabilità del metodo di analisi, assicurando che i terreni colturali usati fossero idonei a permettere lo sviluppo dei microrganismi sopravvissuti al trattamento disinfettante. I ceppi hanno mostrato una percentuale di recupero superiore al 70%, confermando l'affidabilità del metodo. 3. Verifica dell’efficacia del disinfettante: il disinfettante è stato applicato sulle superfici trattate con i ceppi microbici, a diversi tempi di contatto (5, 10 e 15 minuti). L'abbattimento del numero di microrganismi doveva essere di almeno 4 log (3 log per le spore). I risultati più significativi sono stati ottenuti con tempi di contatto di 10 e 15 minuti, con un abbattimento superiore a 4 log per i batteri e 3 log per le spore, su entrambe le superfici. I risultati riportati in questi tesi mostrano che il disinfettante è efficace nel ridurre significativamente la carica microbica sulle superfici trattate, inclusi i microrganismi sporigeni. I dati sono in linea con le normative europee sui biocidi e le linee guida dell'FDA, confermando che il disinfettante è idoneo all’uso nelle condizioni aziendali. In futuro, verrà impiegato in conformità con le indicazioni fornite, garantendo un ambiente sicuro per la produzione farmaceutica.