Teleangectasia emorragica ereditaria: analisi di varianti e messa a punto di un approccio quantitativo per gli studi funzionali

La teleangectasia emorragica ereditaria (HHT) è una malattia genetica rara a trasmissione autosomica dominante, caratterizzata dalla presenza di anomalie vascolari e da episodi emorragici ricorrenti, in particolare epistassi. La prevalenza stimata nella popolazione generale è di circa 1 caso ogni 5000–8000 individui. La diagnosi clinica di HHT si basa sui criteri di Curaçao, che includono epistassi spontanee e ricorrenti, teleangectasie mucocutanee, malformazioni artero-venose viscerali e familiarità per la patologia. La diagnosi è considerata definitiva quando sono presenti almeno tre di questi criteri. L’HHT è principalmente associata a varianti patogenetiche nei geni ENG, ACVRL1, SMAD4 e GDF2, tutti coinvolti nei processi di segnalazione e regolazione dell’angiogenesi. Altri geni, come RASA1, EPHB4 e BMPR2, possono invece essere responsabili di patologie vascolari con manifestazioni cliniche parzialmente sovrapponibili all’HHT. L’obiettivo del presente lavoro di tesi è stato quello di contribuire alla caratterizzazione funzionale di varianti genetiche associate all’HHT, mediante la messa a punto di un approccio quantitativo basato su Real-Time PCR con sonde TaqMan. A tal fine, sono stati analizzati campioni di sangue periferico sottoposti a estrazione di RNA totale, successiva retrotrascrizione e verifica della sintesi di cDNA. È stato inoltre sviluppato un workflow sperimentale standardizzato per l’impostazione delle analisi di espressione genica, volto a garantire uniformità nelle reazioni e ridurre la variabilità tecnica. Sono state selezionate sonde TaqMan specifiche per i geni ENG e ACVRL1 e sono stati considerati geni endogeni di riferimento per la futura normalizzazione dei dati di espressione. I risultati ottenuti hanno permesso di definire le basi metodologiche per l’analisi quantitativa dell’espressione genica nei campioni in studio e di confermare la fattibilità dell’approccio proposto. Il metodo messo a punto rappresenta uno strumento utile per futuri studi funzionali e per una migliore interpretazione del significato biologico delle varianti genetiche associate all’HHT.